文章目录

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.2 方法

    1.2.1 细胞培养及AP模型构建

    1.2.2 慢病毒感染沉默NR5A2

    1.2.3 流式细胞术

    1.2.4 定量逆转录聚合酶链反应

    1.2.5 淀粉酶活性检测

    1.2.6 蛋白质印迹法

    1.2.7 细胞增殖实验

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 模型组与正常对照组促炎因子m RNA及淀粉酶表达量比较

2.2 模型组与正常对照组NR5A2 m RNA及蛋白和核因子κB P65表达量比较

2.3 各组NR5A2 m RNA及蛋白表达量比较

2.4 各组炎症因子m RNA和淀粉酶表达量比较

2.5 各组细胞增殖情况比较

2.6 沉默NR5A2对核因子κB P65表达量的影响

3 讨论

文章摘要:目的探讨肝受体同系物1（NR5A2）对大鼠急性胰腺炎（AP）细胞模型中腺泡细胞损伤修复的影响及其机制。方法将大鼠胰腺腺泡细胞系AR42J细胞分为模型组和正常对照组,模型组予100 nmol/L雨蛙素刺激24 h构建体外AP模型,正常对照组予相同体积的磷酸盐缓冲液培养24 h。取对数生长期的AR42J细胞分为对照组、沉默NR5A2组（KD组）和对照慢病毒感染组（LV-control组）。KD组用慢病毒感染AR42J细胞,对照组不处理,LV-control组感染相同体积的对照慢病毒载体。慢病毒感染96 h后,对照组、KD组和LV-control组均予2%胎牛血清饥饿12 h,100 nmol/L雨蛙素刺激细胞24 h,分别设为正常模型组（CAE组）、沉默NR5A2+雨蛙素组（KC组）和对照慢病毒+雨蛙素组（LV-control+CAE组）。定量逆转录聚合酶链反应检测白细胞介素1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的m RNA表达量,比色法检测细胞淀粉酶的活性,蛋白质印迹法检测NR5A2和核因子κB P65的表达,细胞增殖实验检测细胞的增殖情况。结果模型组IL-1β、IL-6、TNF-αm RNA及淀粉酶表达量均高于正常对照组（均P <0.001）,体外AP模型构建成功。模型组NR5A2 m RNA及蛋白表达量均低于正常对照组,核因子κB P65表达量高于正常对照组（均P <0.05）。慢病毒感染96 h后,KD组NR5A2 m RNA及蛋白表达量均低于对照组和LV-control组[（0.47±0.07）比（1.00±0.07）、（1.00±0.08）,（0.39±0.10）比（1.01±0.08）、（1.04±0.20）]（均P <0.05）。雨蛙素刺激24 h后,KC组IL-1β、IL-6、TNF-αm RNA及淀粉酶表达量均高于CAE组及LV-control+CAE组（均P <0.05）。KC组Ed U阳性百分比低于对照组、CAE组及LV-control+CAE组[（7.97±0.29）%比（71.70±1.64）%、（51.63±0.90）%、（45.37±1.31）%]（P <0.001）。KC组核因子κB P65表达量高于CAE组和LV-control+CAE组（P <0.001）。结论在体外AP细胞模型中,NR5A2的表达降低可以加重腺泡细胞的炎症反应,抑制腺泡细胞的增殖和再生,影响腺泡细胞的损伤修复,其机制可能与上调核因子κB的表达有关。

文章关键词:

论文分类号:R576